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            DNA鑒定常見物理、化學因素的影響

            • admin
            • 2020-05-15 12:45:11
            • 文章來源:科鑒基因
            • 點擊次數:

                 理化因素對DNA分型的影響是常常需要考慮的問題。損傷DNA分子的理化因素來自兩個方面:一是污染物或核酸酶的水解作用使DNA降解;二是各種外力引起的DNA損傷。引起DNA降解的核酸酶可由污染細菌釋出,也可能是原組織內存在的。核酸外切酶作用于DNA分子末端,內切酶則廣泛、隨機地水解DNA雙鏈中磷酸二酯鍵,直接破壞DNA的一級結構。核酸酶的活性依賴Mg2+、Ca2+等金屬離子,提取DNA過程中加入二價金屬離子螯合劑乙二胺四乙酸(EDTA)正是為了抑制核酸酶的作用。在細胞核內,DNA分子與組蛋白結合形成核小體,拔小體對機械性外力作用和各種核酸酶的酶解作用均有一定的抵抗力。檢材提取過程中,在去垢劑和蛋白酶的作用下,組蛋白與DNA分離,DNA分子逐漸伸展。失去蛋白質保護的DNA分子極易受各種物理性外力的作用而斷裂,如溶液的劇烈振蕩或攪拌形成的剪切力均可能打斷DNA分子。另外,高溫、反復凍融也能破壞DNA分子中某些化學鍵。
                  McNally等(1989)研究了環境因素如紫外線、光、熱、濕氣和土壤對血痕中DNA的影響。研究的環境條件包括干血痕暴露在不同濕度(0,33,67和98%)、溫度(37℃)和紫外線中5天時間。結果表明在研究條件下,沒有觀察到錯誤的RFLP分型。被觀察到的惟一效果是RFLP譜帶全面變弱,但個體特異性的RFIP型沒有被破壞。Adams等(1991)研究了環境因素和污染對RFLP分型的影響。對各種影響因素,包括血痕受到其他體液混合的程度、環境因素(陽光和溫度)、不同的基質(棉花,尼龍,藍色斜紋粗棉布,玻璃,金屬,木材)和污染物(汽油,漂白粉,酸,堿,土壤,機油,清潔劑,微生物)進行了觀察。結果表明全部RFLP分型與沒有處理的對照樣品一致。Gross等(1999)研究了魯米諾試驗對PCR分析的影響。分析了魯米諾處理的血痕與下列因素的關系:①魯米諾試驗后,其他化學顏色反應性試驗,如酚酞和聯苯胺試驗的反應能力;②各種血痕基質上的不同物質對魯米諾試驗的影響;③各種血痕基質上的不同物質對DNA提取能力的影響;④3種提取技術從魯米諾處理后的血痕中提取DNA的能力變化;⑤用魯米諾噴射后清洗和沒洗的血痕財PCR分型的影響。結果顯示魯米諾不影響PCR分析,不妨礙酚酞和聯苯胺試驗。而血痕載體基質和不同物質是影響DNA產量和血痕PCR分型的主要因素。
                  一般來說,血痕及其他法醫物證檢材中常有雜質存在,可抑制限制酶消化DNA及PCR反應。常見的雜質有深色染料、苯胺染料及正鐵血紅素(hematin)等。因此,提取的DNA可能含有雜質,影響RFIP及PCR分析,故有時需純化DNA,純化DNA只能除去不與DNA分子結合的雜質。

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